白喉杆菌

白喉杆菌

細菌界棒狀杆菌屬生物
白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae)是引起小兒白喉的病原菌,屬于棒狀杆菌屬(Corynebacterium)。棒狀杆菌種類較多,包括白喉杆菌和類白喉杆菌。類白喉杆菌為非緻病菌,常見的有假白喉杆菌,結膜幹燥杆菌、潰瘍杆菌和痤瘡杆菌等。本章介紹白喉杆菌。[1]
  • 中文名:白喉杆菌
  • 拉丁學名:Corynebacterium diphtheriae
  • 别名:
  • 界:細菌界
  • 門:
  • 亞門:
  • 綱:
  • 亞綱:
  • 目:
  • 亞目:
  • 科:
  • 亞科:
  • 族:
  • 屬:棒狀杆菌屬
  • 亞屬:
  • 種:
  • 亞種:
  • 分布區域:
  • 包括:白喉杆菌和類白喉杆菌

生物學性狀

形态染色

菌體大小為(0.3~0.8μm)×(1~5μm),細長稍彎,粗細不一,菌體一端或兩端排列呈棒狀,排列不規則,常呈L、V、X、T等字形或排成栅欄狀。革蘭氏染色陽性,無莢膜、鞭毛,不産生芽胞;用美蘭液染色菌體着色不均勻,常呈着色深的顆粒;用奈瑟氏染色菌體染成黃褐色,一端或二端染成藍色或深藍色顆粒,稱為異染顆粒(Metachromatic granules),其主要成分是磷酸鹽和核糖核酸,是本菌形态特征之一。

培養特性

白喉杆菌為需氧菌或兼性厭氧菌,最适溫度為37℃,最适PH為7.2~7.8,在含血液、血清或雞蛋的培養基上生長良好。菌落呈灰白色、光滑、圓形凸起,在含有0.033%亞碲酸鉀血清培養基上生長繁殖能吸收碲鹽,并還原為金屬碲,使菌落呈黑色,為本屬其他棒狀杆菌共同特點。且亞碲酸鉀能抑制标本中其他細菌的生長,故亞碲酸鉀血瓊脂平闆可作為棒狀選擇培養基。根據在此培養基上白喉杆菌落的特點及生化反應,可将白喉杆菌區分為重型(Gravis)、中間型(Intermedus)和輕型(Mitis)三型,三型白喉杆菌的分布有所不同,常随地區和年份有别,有流行病學意義。

生化反應

可分解葡萄糖和麥芽糖産酸;某些菌株可分解澱粉和糖原,但不産氣。

變異

白喉杆菌形态、菌落和毒力均可發生變異。菌落可由S型變為R型。無毒株被帶毒素基因的β-棒狀杆菌噬菌體所感染而成為溶原性細菌時,便可産生白喉毒素,并可随細胞分裂而遺傳給子代細菌。

抵抗力

對濕熱的抵抗力不強,對一般消毒劑敏感。60℃經10分鐘或煮沸迅速被殺死,1%石炭酸中經1分鐘死亡,但對幹燥、寒冷和日光的抵抗力較其他無芽孢的細菌為強,在日常物品、食品及衣服上能生存多日,本菌對青黴素和常用抗生素比較敏感。

緻病和免疫

緻病性

本菌的緻病物質主要是白喉毒素。白喉毒素是含有兩個二硫鍵的多肽鍊,分子量為62,000。經蛋白酶水解後,可分為A和B兩個片段,中間仍由二硫鍵聯接。B片段,無酶活性,但能與宿主易感細胞表面特異性受體結合,并通過易位作用使A片段進入細胞。A片段具有酶活性,能将氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷(NAD+)水解為煙酰胺及腺嘌呤二磷酸核糖(ADPR)兩部分,并催化延伸因子-2(Elongation factor-2,EF-2)與ADPR共價結合,使EF-2失去轉位活性,從而中止肽-tRNA及mRNA在核糖體上由受位轉移至供位,肽鍊不能延長,細胞蛋白質合成受阻,細胞死亡,病變産生。

僅攜帶β-棒狀杆菌噬菌體的溶源性白喉杆菌才能産生外毒素,因為白喉毒素就是β棒狀杆菌噬體毒素基因(tox+)編碼的蛋白質。tox+基因的表達與菌體無機鐵含量密切相關,鐵含量适量時, tox+基因表達,否則不表達。

白喉杆菌尚産生一些侵襲性物質,如類似于結核杆菌的索狀因子(Cord factor),能破壞細胞的線粒體膜,導緻呼吸和氧化磷酸化作用受到抑制。

白喉的傳染源是白喉病人及恢複期帶菌者。本菌存在于假膜及鼻咽腔或鼻分泌物内,經飛沫、污染物品或飲食而傳播。白喉杆菌侵入易感者上呼吸道,通常在咽部粘膜生長繁殖,并分泌外毒素及侵襲性物質,引起局部炎症和全身中毒症狀。局部粘膜上皮細胞發生壞死,血管擴張,粒細胞浸潤及纖維滲出,因此形成灰白色膜狀物,稱為假膜(Pseudomembrane),若病損進一步擴展至喉部或氣管内,可引起呼吸道阻塞,甚至窒息。盡管細菌一般不侵入血流,但外毒素可被吸收入血,迅速與易感組織細胞結合,使心肌、肝、腎和腎上腺等發生退行性病變,并可侵犯腭肌和咽肌的周圍神經細胞,臨床上出現心肌炎和軟腭麻痹、聲嘶、腎上腺機能障礙,血壓下降等症狀。本菌偶有侵害眼結膜、外耳道、陰道和皮膚傷口等處,也可形成假膜。

免疫性

白喉病後有較強的免疫力,主要是機體能産生中和白喉外毒素的抗體(lgG)。1~5歲易感性最高,5歲以上易感性逐漸下降,成人絕大多數由于隐性感染或預防接種,已獲得免疫力。

錫克氏試驗(Schick''''s test)用于測定人體對白喉有無免疫力,确定是否需要預防接種。方法是在左前臂屈側皮内注射0.1ml白喉毒素(含1/50的豚鼠最小緻死量),同樣在右前臂屈側皮内注射對照毒素(加熱80℃經5分鐘破壞其毒性)0.1ml,作為對照。陰性反應,兩側注射處都沒有出現紅暈或浸潤,表露機體對白喉有免疫力。陽性反應,左側注射處24~36小時後,出現圓形微隆起紅暈,逐漸形成紅腫硬塊,至第四天達最高峰,直徑達1~2cm,7~14日後反應逐漸消退,而對照側沒有反應,表示對白喉沒有免疫力。假陽性反應,表示既有免疫力,又有變态反應。混合反應,表示機體對白喉毒素沒有抗毒免疫力,但對毒素蛋白則有變态反應,應注意區别。

微生物學診斷

臨床上疑似白喉的病人不必等待檢驗結果,應立即給予抗毒素和抗生素治療。但對于白喉流行期的首例病人應做微生物學檢驗予以證實。

直接染色鏡檢

用棉拭采取假膜邊緣部滲出物,塗片,用奈瑟氏染色或美蘭染色,鏡檢有無含異染顆粒的棒狀杆菌。結合臨床症狀,可作出初步診斷。确診必須通過細菌培養并進行毒力試驗。

凝固血清棉拭培養法

将沾有馬或牛血清的棉拭子放在無菌試管内,經8~10磅蒸氣滅菌20~30分鐘,并使血清凝固,且此凝固血清棉拭采取病人咽部标本,置37℃培養8~10小時後,直接塗片鏡檢。此法可作為大量檢查時快速培養診斷之用。

培養檢查

将棉試檢材接種于雞蛋斜面或Loeffer''''s血清凝固斜面培養基及亞碲酸鉀平闆培養基上,置37℃培養,待斜面或平闆上長出典型的灰色疑菌落,挑取轉種到雞蛋呀或血清斜面進行分離培養,以供進一步形态染色或毒力試驗鑒定。

毒力試驗

1.豚鼠試驗 取體重250g 豚鼠2隻,其中一隻試驗前12小時,由腹腔注射白喉抗毒素250~500單位,供做對照。然後對照。然後各于皮下注射48小時的培養液2ml,若于2~4天注射抗毒素的豚鼠死亡,而對照豚鼠存活,便證明所試驗菌株為有毒白喉杆菌。

2.體外試驗

①瓊脂平闆獨立試驗 又稱E平闆試驗,将浸有白喉抗毒素的無菌濾紙條貼在含20%馬血清的瓊脂平闆上,然後沿濾紙條垂直方向劃線接種待測細菌,同時也接種已知産毒株和不産毒株做為對照。37℃培養48小時後,若待檢菌株産生白喉外毒素,則在濾紙條和劃線生長的菌苔交界外出現白色沉澱線。

②對流免疫電泳:将已知白喉抗毒素與待檢菌培養液分置瓊脂闆兩孔中,通電1~2小時。若兩孔間出現白色沉澱線,表明待檢菌能産生白喉毒素,常用于大樣本量的檢測。

③SPA協同凝集試驗 将白喉抗毒素(IgG)預先吸附于金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)上,再加入待檢菌培養物上清液。若有白喉毒素存在,即可與SPA-IgG結合,出現可見的凝集反應。此法更為簡便,快速。

所緻疾病

白喉杆菌存在于患者或帶菌者的鼻咽腔内,經飛沫或污染物品傳播。

細菌感染機體後,在鼻、咽粘膜上繁殖并分泌外毒素。局部由于細菌和毒素的作用,滲出的纖維素和白細胞及壞死組織凝固在一起,形成灰白色膜狀物,稱為假膜。由于咽、喉、氣管粘膜水腫及假膜脫落,可引起呼吸道阻塞,甚至造成窒息死亡。

細菌一般不入血,隻是細菌産生的外毒素入血,并與易感組織細胞如心肌、肝、腎上腺或支配咽、腭肌等的外周神經結合,可引起細胞變性、壞死、内髒出血和神經麻痹。

臨床上表現有心肌炎、軟腭麻痹、聲嘶、腎上腺功能障礙、血壓下降等症狀。

抗菌防治

通過革蘭氏染色法,我們發現白喉杆菌可以被染成紫色,所以白喉杆菌屬于革蘭氏陽性菌,這在抗生素的選擇上給我們提供了依據。

在抗生素的選擇上,青黴素是首選藥物,青黴素可以通過抑制白喉杆菌細胞壁的合成而起較強殺菌、抑菌作用。一般使用時間為7~10天 用至症狀消失和白喉杆菌培養陰轉為止。如果感染者對青黴素過敏,或應用青黴素1周後培養仍是陽性者,也可以使用紅黴素和四環素。其他抗菌藥物,比如羟氨苄青黴素、利福平等也可能有效。

特異防治

預防接種效果良好,可顯著降低發病率和病死率。6個月以上至3歲兒童應預防接種白喉類毒素、百白破三聯疫苗制劑或明礬澱白喉類毒素。8歲以上錫克氏試驗陽性者也需接種。對密切接觸過白喉病人的易感兒童,可肌内注射1000~2000單位白喉抗毒素作緊急預防,同時注射白喉類毒素以便延長免疫力。

白喉抗毒素做為特效治療制劑,應在發病早期注射足量的白喉抗毒素,一般用量為2萬~10萬單位,作肌肉注射,重者可作靜脈滴注。使用抗毒素血清之前進行皮膚試驗,防止發生異種血清過敏反應。使用抗毒素的同時,應給予抗菌治療,如用普魯卡因青黴素肌注,直至症狀消失和白喉杆菌培養陰性為止。

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