卵泡

發育階段

卵泡發育始于胎兒期。胎兒出生時卵巢中已經存在不同早期發育階段的卵泡。動物進入性成熟期不斷會有成批卵泡及時成長，其中一個或數個成熟和排放，同時也會不斷有卵泡凋亡。一旦動物進入老齡期，随着卵巢機能的退化不再有卵泡發育。根據卵母細胞和顆粒細胞的發育狀況，卵泡大緻可分為原始卵泡、初級卵泡、二級卵泡、三級卵泡和四級卵泡。四級卵泡為成熟卵泡，其餘各級為生長卵泡。

（一）原始卵泡：

體積小，數量多，位于皮質淺層，其卵母細胞由一層扁平的顆粒細胞（源自胚胎期卵巢生殖索的細胞）包圍，通常5～6個原始卵泡成簇集聚，位于卵巢皮質和髓質交界處，血管豐富。

（二）生長卵泡：

位于皮質深層，卵母細胞周圍有透明帶和放射冠包繞，并逐漸出現卵泡腔、卵丘和卵泡膜。初級卵泡，其卵母細胞由一層立方狀的顆粒細胞包圍；二級卵泡，其顆粒細胞在此期間快速分裂，形成多層顆粒細胞層，在卵泡增大的同時，卵母細胞直徑可增大四倍，生發泡（核）也增大，并進入轉錄十分活躍的網狀期，卵外周出現透明帶；三級卵泡，最明顯的特征是出現卵泡液，并積累形成卵泡腔。

（三）成熟卵泡：

四級卵泡體積最大，貼近卵巢表面，，其卵泡腔進一步擴大，卵泡腔大、壁薄，卵丘形成，卵泡向卵巢表面遷移，突出于表面，亦稱格拉夫氏卵泡。

人工誘導卵泡發育成熟的思路

（一）性激素誘導法：

性成熟之前垂體還未大量分泌促性腺激素，卵巢中原始卵泡/初級卵泡數量較多，所處發育階段比較一緻。以雌激素刺激卵泡中顆粒細胞增殖，同時以促性腺激素誘導卵泡成熟，有可能獲得大量發育相對一緻的成熟卵泡。然後從卵泡中回收尚未成熟的卵母細胞和顆粒細胞，在體外經添加營養因子，促進和提高卵母細胞的成熟（率）。

（二）卵泡培養法：

直接自卵巢取出卵泡，體外培養促進成熟，使大量卵泡回避閉鎖。又卵泡在體外培養，卵母細胞和顆粒細胞仍保持它們的原有關系，加入一定量的激素和因子可以使卵泡同步發育成熟。

（三）半卵泡培養法：

半卵泡指的是帶部分鞘膜細胞和完整卵丘細胞的卵泡。利用這種半卵泡可以研究和掌握更完整的卵泡中各類細胞之間的相互關系，以促進其發育和成熟。

（四）利用組織工程技術獲取成熟卵：

首先将鞘膜細胞貼壁在中空纖維上培養，然後将裸卵或卵丘細胞複合物置入，模仿卵泡液環境培養，使卵母細胞成熟。

（五）ES細胞定向培養發育成卵：

ES細胞具有全能性。在體外轉染适當的基因後，培養液中加入适當的誘導分化因子，可使ES細胞定向分化為卵母細胞。現如今用于體外成熟方面的卵母細胞來自三類卵泡：微小的相對休止的原始卵泡；中等大小的生長中卵泡；大的趨向成熟排卵的卵泡。針對這三類卵泡，體外成熟培養條件雖不一樣，但要解決的核心問題均為核與胞質的成熟，以提高卵母細胞體外成熟率或進一步發育的成功率。因此，宜在已有基礎上改進體外成熟培養系統，以能在體外實現完整的卵發生過程、卵母細胞成熟、受精和進一步正常發育；鑒定出為完成着床前發育所必需的母系因子。