乙肝病毒DNA檢測:利用DNA檢測乙肝病毒的技術方法-中文百科頻道

方法優點

DNA檢測方法由于其特異性好、靈敏度高、操作簡便等原因已成為物種鑒定的主要檢測方法。首先，DNA在細胞中含量相對穩定，比蛋白質耐熱，在産品的加工過程中也相對不容易被破壞，從加工産品中仍能提取出足夠可供分析的小片段DNA；其次，DNA信息量大，物種的差異直接反映在DNA序列的差異上。可以根據DNA上不同區域、基因、片段的進化特點選擇适合的靶基因進行檢測；第三，DNA的序列穩定，不同組織類型、年齡和狀态影響不大；第四，由于基因技術的發展，DNA檢測技術可以發現含量低至幾個拷貝的基因，使分析水平從常量水平發展到痕量水平；第五，各類高精尖儀器的研發使得檢測時間大大縮短，操作也更為便捷。自動化檢測更是有助于提高操作的精确度，防止交又污染和有害有毒物質的損害。

以往乙肝患者抗病毒治療的指征是：乙肝病毒e抗原陽性（大三陽）患者HBVDNA數值要求達到10的5次方拷貝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原陰性（小三陽）患者乙肝病毒DNA數值要求達到10的4次方拷貝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷貝/毫升以下也不能認為就沒有問題了，最新的國際研究資料表明：和肝髒疾病進展相關的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持續低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在進一步發展，因此HBVDNA數值應該越低越好，國際建議的HBVDNA檢測正常值應該是：<50U/ml。

主要作用

乙肝病毒DNA檢測在乙肝檢查化驗中使用的越來越普遍，可見乙肝病毒DNA檢測在乙肝檢查化驗中占的分量越來越重，這是因為乙肝病毒DNA檢測對确診乙肝和評估乙肝治療效果具有十分重要的作用。主要表現在以下七個方面：

1、了解乙肝病毒在體内存在的數量。

2、乙肝病毒是否複制。

3、乙肝是否傳染，傳染性有多強。

4、是否有必要服藥。

5、肝功能異常改變是否由病毒引起。

6、判斷病人是适合用哪類抗病毒藥物。

7、判斷藥物治療的療效。

臨床意義

所以說HBV—DNA定量檢測指标降低在乙肝治療中有着非常重要的意義，是乙肝轉陰的前奏，也是康複最為關鍵的一步，隻有體内的HBV—DNA定量指标降低，病毒的複制繁殖才會停止，乙肝的徹底治愈才有希望。

乙肝病毒DNA檢測的臨床意義一、對醫生的診斷和用藥非常重要。通過乙肝病毒DNA檢測能夠判定判斷乙肝患者适合用哪類抗病毒藥物；乙肝病毒DNA檢測對用藥的劑量、用藥時間、是否需要聯合用藥以及用藥的效果等提供重要的參考依據，也是臨床上評價抗病毒或免疫增強藥物療效的最客觀的指标。

乙肝病毒DNA檢測的臨床意義二、能夠直接反映乙肝病毒複制狀态及傳染性的最佳指标，通過乙肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在體内存在的數量、是否傳染，傳染性有多強。但是需要說明的一點是：乙肝病毒載量的多少并不代表肝髒的損傷程度，也無法判斷病情的嚴重程度。

乙肝病毒DNA檢測的臨床意義三、反映病毒複制的活躍程度，間接地反映機體的免疫應答水平。

複制過程

不同于一個真正的生物體，病毒并不通過生長和分裂等方式繁殖自身，而是像鑄造機器零件一樣，按照一定的模具拷貝出來的。病毒DNA中包含有一些程序，指導病毒的遺傳物質和其它一些結構蛋白組分增殖。另外，病毒DNA中還包含有一些信息，使得單一組分能夠在細胞因子的幫助下，自發組裝成新的病毒顆粒。

在醫學上，病毒的繁殖被稱之為“複制”，在複制的過程中，有兩個很重要的因素：一個是催化劑，另一個是模闆。沒有這兩個因素，乙肝病毒就不能複制。乙肝病毒複制的“催化劑”就是乙肝病毒DNA（即HBV-DNA）聚合酶。沒有這種聚合酶的作用，乙肝病毒的複制就會停止。

乙肝病毒的基因組（HBV-DNA）是由兩條螺旋的DNA鍊圍成的一個環形結構。其中一條較長負鍊已經形成完整的環狀；另一條長度較短的正鍊，呈半環狀。在感染肝細胞之後，這條半環狀的DNA鍊就會以負鍊為模闆，在催化劑──HBV-DNA聚合酶的作用下延長，最終形成完整的環狀。這時的乙肝病毒基因組就形成了一個完全環狀的雙股DNA。把這種DNA稱做共價閉合環狀DNA（即cccDNA），可以把它看作是病毒複制的原始模闆。模闆形成後，病毒基因會以其中的一條cccDNA為模闆，利用肝細胞基因中的酶和DNA聚合酶的“催化”，一段基因又一段基因地複制，形成負鍊和正鍊。最後再裝配到一起形成新的HBV-DNA顆粒。

第一步：黏附

HBV人侵人體後，依靠其外膜(表面抗原，HBsAg)能粘附在肝細胞膜上，當然，粘附的首要條件是HBsAg先要識别肝細胞膜。一旦粘附成功，HBv的外膜也就完成了它的使命，甩掉了外膜，HBV鑽進肝細胞内。

第二步:脫殼

HBV核心部分來到肝細胞内，在肝細胞漿中還要脫掉它的“核殼”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG)，這樣，就暴露出了它最核心部分，即乙肝病毒核酸(HBv DNA)，HBV大有“赤膊上陣”之意。HBV-DNA包涵着乙肝病毒的全部基因，是它主宰着HBv的複制的。

第三步：入核

HBv-DNA從肝細胞漿内進入肝細胞核，在這裡它要進一步發育完善，形成了HBv的“共價閉合環狀脫氧核塘核酸”(HBv cccDNA)。這個cccDNA十分了得，它深深藏匿在肝細胞核内，而肝細胞核外面有一層堅韌的核膜，藥物都難以通過這堅韌的核膜，因而對cccDNA也無可奈何，但cccDNA卻掌控着HBv所有的遺傳信息，指令着HBv的複制。因此．現有的藥物想徹底消滅人體内的HBv真比登天還難，這些藥物隻能抑制HBv的繁殖或複制，“全部轉陰”也隻能是一種幻想。

第四步：轉錄

HBV在這一階段會以cccDNA為“模子”，像錄音帶似的把HBv cccDNA上的所有信息全都轉錄到“信息核糖核酸”(mRNA)上。這個轉錄過程需要人體内的酶類幫忙，因為所有的病毒都不能自己獨立生活．必須有生物的機體幫忙，才能完成這個轉錄過程。HBv也是這樣。在人體酶類的幫助下完成它的複制環節。

第五步：翻譯

在mRNA上已錄取了HBv的所有信息，然後就是“翻譯”了，其實就是開始制造病毒蛋白。MRNA通過“翻譯”過程，可将HBv的各種蛋白制造出來，如HBv的外膜蛋白(HBsAg)、核殼蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等；至此，HBv的外膜有了，HBv的核殼也有了，這些東西隻是零件，飄浮遊離着的，還有重要的HBv最核心部分沒有“制造”山來。

第六步：逆轉錄

啥叫“逆轉錄””把HBv的遺傳信息從DNA轉錄到RNA上叫做“轉錄”，是正常的“順轉錄”；而将HBv的遺傳信息從RNA上再轉錄到DNA上，就叫做“逆轉錄”了。那麼，HBv的mRNA上的遺傳信息最後就轉錄成了HBV的DNA，這時，HBv的最核心部分(即HBv DNA)也算制造完成。

第七步：組裝

從第五步和第六步的複制看來，HBv的所有零件均已制作完畢，到了第七步也就簡單了，把這些零件進行組裝，裝配妥了，HBv的複制也算大功告成了。

HBv就是這樣繁殖或複制的。看起來好像挺複雜，其實HBv複制過程是很快的．一個複制周期不到48小時。複制出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝細胞，或被釋放到血液中去，在人們抽血化驗時也就被檢測到了。

建議檢測頻率

無論是大三陽還是小三陽的病人，發現患有乙肝的時候就建議檢測HBV DNA。一般來說，病人的具體情況可能會不太一樣，如果在一個病毒的活動期，乙肝病毒DNA檢測可能需要勤一些，一到兩個月就應檢測一次，如果是在病毒的耐受期，病情相對比較穩定，可以3—6個月檢測一次。在進行抗病毒治療的過程中，也是需要定期檢測HBV DNA。一般來說至少三個月要檢查一次。

注意事項

檢查注意事項：

1、這個檢查與是否進餐沒有任何關系,所以如果你隻做HBV DNA檢查,可以檢查前進餐.

2、如果你還要做肝功能檢查，建議你在檢查前避免進，避免熬，避免酗酒,避免用藥,女性生理期避免做肝功能檢查。

對于乙肝結果的認識，有這幾點注意事項：

1、關于單位的換算.最常見的單位是copies/ml,也有重量的單位,比如fg/ml,pg/ml.1pg=1000fg,那麼1pg/ml=283,000copies/ml.

2、由于PCR的方法雖然精确度，但是誤差相對較大,而且假陽性率也比較，所以，對于每次乙肝DNA檢查的結果,在兩個數量級之内的變化，通常會認為沒有變化或變化不大.而且DNA也在不斷的波動,所以不能以一次或兩次的檢查結果就簡單的判斷是否好轉，應該綜合其它結果以及DNA的變化趨勢。

3、對于乙肝陰性的标準,我們一般認為是10的3次方,但不能一概而論,應該視化驗單上具體給出的參考值而定.陰性最準确的表達方式是,未檢測到,化驗單表示為<參考值copies/ml,并沒有具體的數值。

4、DNA複制程度的大小并不代表肝髒實際損害的程度,DNA複制程度高,并非就代表損害嚴重。

檢測方法

主要有：熒光定量PCR技術、競争PCR技術、PCR酶聯免疫吸附法、熒光标記引物法和PCR酶聯化學發光法。

臨床上最先進的乙肝病毒DNA檢測方法是實時熒光定量PCR方法，由于此技術要求較高，隻有少數大型醫院有條件使用實時熒光定量PCR方法。

檢測報告

1、乙肝病毒DNA檢測報告：主要包括定性和定量。

2、定性，即确定是陰性還是陽性。乙肝病毒DNA的正常值為陰性，即乙肝病毒DNA<1x10的3次方拷貝/ml

3、定性測得的陽性通常說明病毒容易傳染給他人，陰性說明不容易傳給他人。對于乙肝大三陽來說，由于乙肝病毒e抗原(HBeAg)是陽性，所以乙肝病毒-DNA也是陽性的，表示乙肝病毒-DNA>1x10的3次方拷貝/ml，這時體内的乙肝病毒複制活躍。

4、定量，即檢測乙肝病毒在血液中的含量。定量檢測結果主要是對抗病毒治療提供檢測和療效參考。由于結果是數字的，而不是“高/低”、“陰/陽”、“正常/不正常”，所以看起來比較麻煩。确定正常值指标一定要知道所做實驗的參考範圍。參考範圍因檢測儀器、方法、試劑的不同而有差異。

5、“+”：陽性，體内病毒存在複制。對應于定量方式中HBV-DNA>1x10E3copies/ml。

6、“－”：陰性，病毒的複制程度低于檢測限。對應于定量方式中HBV-DNA<1x10E3copies/ml。

7、定量：HBV-DNA定量單位在報告單上通常用“copies/ml”、“拷貝數/ml”或“IV/ml”表示，表示每毫升的血清或血漿中病毒基因組的個數，該數據越大，表明病毒在人體的複制越厲害，例如“HBV-DNA=4.3x10E3copies/ml”代表每毫升血清中有4.3乘以10的3次方，也即4300個乙肝病毒。

檢測費用

乙肝患者到醫院檢查确診病情或者複查時，都要進行乙肝病毒DNA檢測，這一檢測項目已經成為觀察乙肝病毒實際情況的最重要和最關鍵的指标，在抗病毒治療時，也需要進行乙肝DNA病毒檢查。

乙肝病毒DNA檢測費用受不同因素的影響而有一定差異。乙肝病毒DNA檢測費用大概在100元左右。如果用進口試劑化驗定量大約需要150-200元。

乙肝病毒DNA檢測系統技術要求嚴格，對肝病醫院人員，醫療技術，環境有很高的要求，隻有正規，具備一定等級的大型醫院具備乙肝HBV-DNA檢測系統的資格。

檢測要空腹嗎

單純檢測乙肝病毒DNA時是不需要空腹的，這主要是因為乙肝病毒DNA指的是乙肝病毒的核心物質和病毒複制的基礎，是不受飲食、運動以及休息等因素影響的，也就是說進不進食食物是不會直接影響乙肝病毒DNA檢測結果準确性的，所以說單純檢測乙肝病毒DNA時是不需要特别注意空腹的。但如果在檢測乙肝病毒DNA的同時需檢測肝功能、肝髒B超等則應注意空腹檢測。