原理
免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物後獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的标記物如酶标結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，随着分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。
HBsAg試劑特點（檢測模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體為與HBsAg有不同結合位點的鼠複合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性（99.98%）提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg标準品，對ad标準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay标準品靈敏度為0.025ng/ml
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔闆闆條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分别來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。将樣品或标準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗闆除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。
然後加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經第二次孵育後，酶結合物就會與第一次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗闆除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，隻有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的複合物的孔才會發生顔色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試标準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
用途
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶标記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶标記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢标本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開。再加入酶标記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與标本中受檢物質的量呈一定的比例。
加入酶反應的底物後，底物被酶催化成為有色産物，産物的量與标本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。
然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。
特點
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩定的重複性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、适用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種标本類型；
五、節省實驗經費。
elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标準數據為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關系，說明方法的準确度。比如水中總無機氯含量測定，樣品水中含有無機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯标準樣品，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L，則認為回收率為99%。
制備方法
包括以下步驟：
1)抗原表位的計算機篩選；
2)抗原的制備；
3)血清的采集；
4)間接ELISA方法的建立；
5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；
6)試劑盒的穩定性驗證；
7)對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩定性合格、重複性好。應用本發明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型肝炎病毒，适用于大批量發病樣本的檢測，可用于豬戊肝的快速診斷，并預防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播。
組成結構
1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和内毒素的試管。收集血液後，1000×g離心10分鐘将血紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿：将組織加入适量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、保存：如果樣品不立即使用，應将其分成小部分-70℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并确保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測
操作方法
雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液将抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯闆的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔内溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.加酶标抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶标抗體（經滴定後的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔内顔色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顔色的深淺，以“+”、“-”号表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法
1.用包被緩沖液将已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶标第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.’最後一遍用DDW洗滌。
其餘步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
發展前景
臨床測定技術的發展主要在于方法學的發展，而方法學的發展依托于試劑生産技術不斷進步更新和型标記物的應用。分子生物學正在并最終肯定會讓對整個生命科學有一個全面而徹底的認識，其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的，對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
測試要求
做好對照
正式試驗時，應分别以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準确性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
實驗條件的選擇
在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平闆、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔闆。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：将抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的最适濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被後，在其它試驗條件相同時，觀察陽性标本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。
（3）酶标記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶标記抗體部份）。然後再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶标記抗體分别為不同的稀釋度）在正式實驗系統裡準确地滴定其工作濃度。
（4）酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的緻癌作用，應注意防護。有條件者應使用不緻癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間後，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
應用
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅适用于臨床标本的檢查，而且由于一天之内可以檢查幾百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用範圍日益擴大。
可概括四個方面：
1、免疫酶染色各種細胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗體的合成。
3、顯現微量的免疫沉澱反應。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
