提取分離
人參根經過30%乙醇滲漉提取人參皂甙後剩餘的人參根廢渣,切碎後,用沸水煮提二次,每次3小時,用尼龍布過濾,濃縮濾液,加3~4倍量乙醇醇析,沉澱部分幹燥後,獲得熱水提取物,收率約為40%(以人參根幹重計),其中含有多糖(包括澱粉與果膠等)、蛋白質、灰分等。如首先将濾液放冷、靜置,則有大量白色沉澱析出,白色沉澱物為冷水不溶性人參澱粉,取其上層水溶液離心(3000rpm),除去懸浮的澱粉小顆粒,反複醇析,獲得可溶于冷水的成分水溶性人參粗多糖,收率約為8%~10%(以人參根幹重計)。
從人參中提取水溶性粗多糖,經Savage法去除蛋白、醇沉得到人參總多糖(GP),通過離子交換層析對總多糖分離純化,得到一個中性糖(GP-N)和三個酸性糖級分(GP-1、GP-2、GP-3)。各個級分離單糖組成和分子量采用高效液相色譜及凝膠柱層析法進行分析,發現其結構特點。通過水提醇沉法提取人參粗多糖,确定了料液比1:5,提取時間為8h,100℃水浴時,得率最高。按照水提醇沉法從500mg人參樣品中得到100mg人參水溶性總粗多糖(GP),收率約為20%。
人參粗多糖溶于水後形成膠體溶液,其中含糖量約為89%(酚-硫酸法檢查),含蛋白質約為5%,其餘為灰分。
鑒别
取本品加甲醇制成37.0%溶液作供試液。取人參标準對照藥材1.09加甲醇30mL,超聲提取30分鐘,濾液濃縮至1mL作對照液。取上述二液各10μL,分别點于同一矽膠G闆,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)下層展開,噴10%硫酸乙醇溶液,熱風吹顯,紫外燈365nm和日光下檢視,斑點對應率≥80%。
取本品與人參多糖對照品各20mg加入2moL/L硫酸2mL,110℃水解6h,BaCO3中和至pH6~7,離心,上清液濃縮至1mL,各取10μL,分别點于同一矽膠G闆,以乙酸乙酯-吡啶-冰醋酸-水(5:5:1:3)展開,噴鄰苯二甲酸苯胺試液,熱風吹濕,斑點對應率≥80%。
藥理作用
(1)本品能誘生内源性腫瘤壞死因子(TNF),對腫瘤細胞有殺傷和抑制作用,對正常小鼠及荷瘤小鼠機體免疫功能有增強和激活作用。
(2)本品對小鼠S180肉瘤有明顯的抑制作用;對環磷酰胺化療有明顯的抑瘤增效作用;對環磷酰胺化療所緻的白細胞總數減少,有明顯的升白作用;并能明顯提高S180肉瘤荷瘤小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能,促進血清溶血素(IgM)生成,具有增強非特異免疫功能和體液免疫功能的作用。
(3)通過對受7.5-8.5GyX射線一次全身照射小鼠預防給藥試驗,表現本品對受照動物有減輕造血系統損傷、促進造血功能恢複的抗輻射損傷作用。
(4)本品對D-氨基酸半乳糖所緻的肝損傷具有明顯的保護作用。其作用機制是穩定和加強肝細胞膜、保護肝細胞線粒體及維持肝組織cAMP/cGMP的相對穩定。
(5)本品肌内注射及靜脈注射給藥均未見急性毒性反應。