背景設定
某天，操縱着強力魔法的大烏龜酷霸王一族侵略了蘑菇們居住的和平王國。老實巴交的蘑菇一族都被酷霸王變成了岩石、磚塊或筆頭菜等各種形狀，蘑菇王國即将滅亡。
能夠解開蘑菇們的魔法、讓他們蘇醒的，隻有蘑菇王國的公主——桃花公主。然而，她卻被大魔王酷霸王所捉住。
為了打倒烏龜一族、救出桃花公主、給蘑菇王國帶回和平，馬力歐決定站出來，向酷霸王發起挑戰。
角色設定
玩家角色
在遊戲中，1P玩家控制的角色是穿着紅色的子和衣服的馬力歐，2P玩家則控制以綠色帽子和衣服為标志的路易吉。2P玩家控制路易吉進行遊戲時，使用各種道具時與馬力歐具有同樣的效果。
參考資料：
主要角色
物品道具
裝備
- 1UP蘑菇：獲得後，馬力歐可增加1條生命。 彈簧：馬力歐踏上後，可以在它伸展時通過按下A鍵來進行高跳。
消耗品
- 金币：收集100枚硬币後，馬力歐可增加1條生命。 蘑菇：獲得後，馬力歐将進入超級馬力歐狀态。 火焰花：獲得後，馬力歐将進入火球馬力歐狀态。 無敵星：獲得後，馬力歐将進入無敵馬力歐狀态。
場景地圖
玩家在遊戲中将在蘑菇王國内冒險。蘑菇王國由8個世界組成，每個世界有4個區域，并且每個世界的第4個區域都是各個世界的城堡。城堡内有着被抓走的公主和侍奉公主的奇諾比奧。為了救出桃花公主，馬力歐必須要在一定時間内通關各個區域。馬力歐需要闖過山脈、峽谷、大海，除了要與酷霸王的士兵們對戰外，各種各樣的苦難和謎題也等待着馬力歐去承受和解決。
遊戲機制
操作方法
玩家需要通過十字鍵的左右鍵來移動馬力歐，如果同時按住B鍵，玩家可以加快馬力歐的移動速度。而處于超級馬力歐狀态時，使用下鍵還可以讓馬力歐蹲下來。
按下A鍵時，馬力歐可以進行跳躍；長時間按住A鍵的話，馬力歐會跳的更高；在水中遊泳時，按住A鍵能讓馬力歐上浮。
當馬力歐處于火球馬力歐狀态時，使用B鍵可以讓馬力歐投擲出火球去攻擊敵人。
關卡機制
玩家基本上是通過側面視角的跳躍動作、以到達右側某個終點為目的來遊玩。遊戲關卡都是橫向從左向右進行的，除了各個世界的區域4外，每個關卡的終點都是旗杆。如果玩家在某一關中丢了1條命，那麼玩家就會本關從頭開始。但如果在丢命之前過了半程點，那麼玩家就會從半程點重新開始冒險。當觸碰旗杆後，系統會計算剩餘時間為玩家提供獎勵，随後玩家便可通關。
遊戲評測
遊戲的故事簡單而有趣。馬力歐跳躍着前進，可以吃蘑菇讓自己長大、可以踩死“烏鴉”得分、可以用火球将爬行的烏龜打進溝裡。玩家每一關的任務便是走到畫面的盡頭打倒BOSS酷霸王老怪、營救公主。這是曆史上第一款橫向卷軸遊戲。它僅僅32KB的程序和8KB的圖像數據，卻保持着曆史上銷量最大遊戲的紀錄。（騰訊網 評）
雖然《超級馬力歐兄弟》是平台動作遊戲的鼻祖級作品，但它在多年後依然是同類遊戲中的佼佼者。從當下的标準來看，這款遊戲畫面可能不夠鮮豔、水管工的标志性胡須的分辨率也不高，但當玩家控制馬力歐或是雙人模式下的路易吉展開冒險、拯救被猙獰的酷霸王囚禁的公主時，遊戲中出色的敵人設計、隐蔽詭秘的世界以及充滿加勒比風情的音樂定會讓玩家過目難忘。最重要的是，遊戲給人一種真實感，這正是當今許多平台動作遊戲所缺少的重要品質。緊張的地下關卡和空中關卡對玩家操作的精準性有更大的要求，可破壞度極高的環境與那些知名變身元素都令人印象深刻。《超級馬力歐兄弟》可謂德高望重，但又還不至于到垂垂老矣的地步。許多遊戲遠比超級馬力歐來得複雜，但這款明快的小遊戲所取得的巨大成就卻是它們望塵莫及的。（《有生之年非玩不可的1001款遊戲》 評）
