菌種活化:微生物學實驗-中文百科頻道

定義

把微生物從保藏斜面轉接到活化斜面上，使其活性得以恢複，相對而言活化斜面培養基中的營養更豐富些，從而使微生物活性恢複的同時恢複其優良的生産性能。

步驟

1、配置菌種适宜生長的培養基。

2、将菌種從保藏狀态恢複到室溫狀态，比如将冷凍的菌種解凍。

3、将通過操作将保藏的菌種接種到培養基中培養，此步驟稱為菌種複壯。

4、挑選培養基茁壯的菌落，挑選其中部分菌落接種到新的培養基中培養，重複此步驟2-3次，從而得到生長良好的菌落培養基：LB培養基，對于含有質粒的菌種可以在活化培養後，接種到含有抗生素的平闆上，進行篩選，然後将長出的菌落接種到斜面或者平闆上保存。

操作過程

一般操作過程

1、在無菌操作下，用無菌微量吸管，從已溶解的管中吸取50μL（或1-2滴）的菌液，滴入固态指定培養基（培養基編号及溫度示于菌株訂購單）某一邊緣附近，以劃線法接種于培養基。

2、将接種好的培養基置于指定溫度的培養箱中培養。

3、在無菌環境下，以沾有75%酒精的棉花擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖端。滴數滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。取出隔熱纖維紙和内管，以滅菌過的鑷子取出内管之棉塞。

4、（a）适用于細菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定之液體培養基，滴入内管内，并輕微震蕩（可用該吸管協助），直到均勻懸浮。（b）适用于黴菌、酵母菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5ml無菌水，滴入内管内，待幹燥粉末溶解後，以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管内，輕微震蕩使其均勻後，靜置30至60分鐘。

5、取0.1-0.2ml之菌體懸浮液于指定的平闆培養基上，做劃線分離培養或做成一系列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻塗抹，以檢驗菌種之純度及活化情形，而剩餘的菌體則全部移入指定的液體培養基内，并依指定的溫度培養之。

6、某些菌種經過冷凍幹燥保存後，遲滞期(lagperiod)較長，必須等培養二倍時間後才能長出，且再經過一、二次繼代培養(Subculture)後才能正常生長。經過以上的努力後仍培養失敗，才視為不能活化。

7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時，請于收到菌種之一個月内，以問題菌株反應單傳真至本中心，即進行處理。

8、未開封之冷凍幹燥管，請冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。

其他操作過程

要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏方式和方法。國際國内常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍幹燥法、80℃冰箱凍結法、液氮超低溫凍結法。

對于不同的保存方式活化的方式也不同：

1、定期移植法的菌種複蘇較簡單，直接轉接即可。

2、液體石蠟法保存的菌種在複蘇時，挑取少量菌體轉接在适宜的新鮮培養基上，生長繁殖後，再重新轉接一次。

3、沙土管法保存菌種在複蘇時，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培養基上，長出菌落後再轉接一次。或取沙土粒于适宜的液體培養基中，增殖培養後再轉接斜面。

4、真空冷凍幹燥法保存菌種在複蘇時先用75%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管頂部燒熱，

用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養基上，進行适溫培養。

5、-80℃冰箱凍結法保存菌種複蘇時，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置38℃-40℃水浴中快速複蘇并适當快速搖動。直到内部結冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，将内容物移至适宜的培養基上進行培養

6、液氮超低溫凍結法保存菌種複蘇與-80℃冰箱凍結法保存菌種複蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速複蘇并适當搖動。直到内部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，将内容物移至适宜的培養基上進行培養。

操作方法

平闆劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平闆培養基表面通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反複分離多次才可得到純種。其原理是将微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的的。

1、手持金屬接種環，用酒精燈将接種環（共約5公分）燒至火紅，并不斷來回燒烤金屬固定杆之前約10公分，等待約10秒鐘，将接種環前端輕觸培養基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環完全冷卻後，以環沾黏菌滴，由培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋培養基為止（I區）。

2、灼燒接種環，待數秒冷卻後，旋轉培養基自I區塗布的邊緣再橫劃數條線到未接種的區域（II區）。

3、重複步驟2的動作完成III區與IV區。

4、灼燒接種環，将接種環歸位。