慢病毒

慢病毒

基因治療載體
慢病毒(Lentivirus)載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體。區别一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體能夠産生表達shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性細胞、幹細胞、受精卵以及分化的後代細胞中表達shRNA,實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默,為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能,以及産生特定基因表達降低的動物提供了可能性。[1]
    中文名:慢病毒 外文名:lentivirus 别名: 性 質:基因治療載體 特 點:對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力

簡介

慢病毒載體的研究發展得很快,研究的也非常深入。該載體可以将外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。

在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、内皮細胞、幹細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因治療效果,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應用前景。

相關實驗

實驗目的

對于一些按常規方法難以轉染甚至無法轉染的細胞,通過病毒介導的實驗能夠大大提高基因的轉導效率,以達到目的基因的高效瞬時表達。

實驗流程

1. 根據目的基因相關信息(序列,序列号等),構建含有外源基因或siRNA的重組載體;

2. 對于測序正确的重組質粒,提取和純化高質量的不含内毒素的重組質粒;

3. 使用高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染293T 細胞,進行病毒包裝和生産,收集病毒

液;

4. 濃縮、純化病毒液;

5. 用高質量的病毒液感染細胞;

6. 通過定量PCR精确測定病毒滴度(高精确滴定方法)和Western 分析實驗結果;

7. 用高質量的病毒液感染宿主細胞;檢測基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進

行穩定轉染細胞株的篩選,通常狀況下,篩選的細胞克隆株具有長期的表達穩定

性。病毒液足夠用于一般的動物活體實驗。

上一篇:逸美

下一篇:卡牌萌獸

相關詞條

相關搜索

其它詞條