簡介
慢病毒載體的研究發展得很快,研究的也非常深入。該載體可以将外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。
在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、内皮細胞、幹細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因治療效果,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應用前景。
相關實驗
實驗目的
對于一些按常規方法難以轉染甚至無法轉染的細胞,通過病毒介導的實驗能夠大大提高基因的轉導效率,以達到目的基因的高效瞬時表達。
實驗流程
1. 根據目的基因相關信息(序列,序列号等),構建含有外源基因或siRNA的重組載體;
2. 對于測序正确的重組質粒,提取和純化高質量的不含内毒素的重組質粒;
3. 使用高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染293T 細胞,進行病毒包裝和生産,收集病毒
液;
4. 濃縮、純化病毒液;
5. 用高質量的病毒液感染細胞;
6. 通過定量PCR精确測定病毒滴度(高精确滴定方法)和Western 分析實驗結果;
7. 用高質量的病毒液感染宿主細胞;檢測基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進
行穩定轉染細胞株的篩選,通常狀況下,篩選的細胞克隆株具有長期的表達穩定
性。病毒液足夠用于一般的動物活體實驗。