背景设定
某天，操纵着强力魔法的大乌龟酷霸王一族侵略了蘑菇们居住的和平王国。老实巴交的蘑菇一族都被酷霸王变成了岩石、砖块或笔头菜等各种形状，蘑菇王国即将灭亡。
能够解开蘑菇们的魔法、让他们苏醒的，只有蘑菇王国的公主——桃花公主。然而，她却被大魔王酷霸王所捉住。
为了打倒乌龟一族、救出桃花公主、给蘑菇王国带回和平，马力欧决定站出来，向酷霸王发起挑战。
角色设定
玩家角色
在游戏中，1P玩家控制的角色是穿着红色的子和衣服的马力欧，2P玩家则控制以绿色帽子和衣服为标志的路易吉。2P玩家控制路易吉进行游戏时，使用各种道具时与马力欧具有同样的效果。
参考资料：
主要角色
物品道具
装备
- 1UP蘑菇：获得后，马力欧可增加1条生命。 弹簧：马力欧踏上后，可以在它伸展时通过按下A键来进行高跳。
消耗品
- 金币：收集100枚硬币后，马力欧可增加1条生命。 蘑菇：获得后，马力欧将进入超级马力欧状态。 火焰花：获得后，马力欧将进入火球马力欧状态。 无敌星：获得后，马力欧将进入无敌马力欧状态。
场景地图
玩家在游戏中将在蘑菇王国内冒险。蘑菇王国由8个世界组成，每个世界有4个区域，并且每个世界的第4个区域都是各个世界的城堡。城堡内有着被抓走的公主和侍奉公主的奇诺比奥。为了救出桃花公主，马力欧必须要在一定时间内通关各个区域。马力欧需要闯过山脉、峡谷、大海，除了要与酷霸王的士兵们对战外，各种各样的苦难和谜题也等待着马力欧去承受和解决。
游戏机制
操作方法
玩家需要通过十字键的左右键来移动马力欧，如果同时按住B键，玩家可以加快马力欧的移动速度。而处于超级马力欧状态时，使用下键还可以让马力欧蹲下来。
按下A键时，马力欧可以进行跳跃；长时间按住A键的话，马力欧会跳的更高；在水中游泳时，按住A键能让马力欧上浮。
当马力欧处于火球马力欧状态时，使用B键可以让马力欧投掷出火球去攻击敌人。
关卡机制
玩家基本上是通过侧面视角的跳跃动作、以到达右侧某个终点为目的来游玩。游戏关卡都是横向从左向右进行的，除了各个世界的区域4外，每个关卡的终点都是旗杆。如果玩家在某一关中丢了1条命，那么玩家就会本关从头开始。但如果在丢命之前过了半程点，那么玩家就会从半程点重新开始冒险。当触碰旗杆后，系统会计算剩余时间为玩家提供奖励，随后玩家便可通关。
游戏评测
游戏的故事简单而有趣。马力欧跳跃着前进，可以吃蘑菇让自己长大、可以踩死“乌鸦”得分、可以用火球将爬行的乌龟打进沟里。玩家每一关的任务便是走到画面的尽头打倒BOSS酷霸王老怪、营救公主。这是历史上第一款横向卷轴游戏。它仅仅32KB的程序和8KB的图像数据，却保持着历史上销量最大游戏的纪录。（腾讯网 评）
虽然《超级马力欧兄弟》是平台动作游戏的鼻祖级作品，但它在多年后依然是同类游戏中的佼佼者。从当下的标准来看，这款游戏画面可能不够鲜艳、水管工的标志性胡须的分辨率也不高，但当玩家控制马力欧或是双人模式下的路易吉展开冒险、拯救被狰狞的酷霸王囚禁的公主时，游戏中出色的敌人设计、隐蔽诡秘的世界以及充满加勒比风情的音乐定会让玩家过目难忘。最重要的是，游戏给人一种真实感，这正是当今许多平台动作游戏所缺少的重要品质。紧张的地下关卡和空中关卡对玩家操作的精准性有更大的要求，可破坏度极高的环境与那些知名变身元素都令人印象深刻。《超级马力欧兄弟》可谓德高望重，但又还不至于到垂垂老矣的地步。许多游戏远比超级马力欧来得复杂，但这款明快的小游戏所取得的巨大成就却是它们望尘莫及的。（《有生之年非玩不可的1001款游戏》 评）
