菌种活化:微生物学实验-中文百科频道

定义

把微生物从保藏斜面转接到活化斜面上，使其活性得以恢复，相对而言活化斜面培养基中的营养更丰富些，从而使微生物活性恢复的同时恢复其优良的生产性能。

步骤

1、配置菌种适宜生长的培养基。

2、将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻。

3、将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮。

4、挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落培养基：LB培养基，对于含有质粒的菌种可以在活化培养后，接种到含有抗生素的平板上，进行筛选，然后将长出的菌落接种到斜面或者平板上保存。

操作过程

一般操作过程

1、在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL（或1-2滴）的菌液，滴入固态指定培养基（培养基编号及温度示于菌株订购单）某一边缘附近，以划线法接种于培养基。

2、将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。

3、在无菌环境下，以沾有75%酒精的棉花擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。

4、（a）适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。（b）适用于霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。

5、取0.1-0.2ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。

6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期(lagperiod)较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养(Subculture)后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。

7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。

8、未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4℃冰箱，切勿冷冻保存。

其他操作过程

要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏方式和方法。国际国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。

对于不同的保存方式活化的方式也不同：

1、定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可。

2、液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。

3、沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

4、真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用75%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热，

用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养。

5、-80℃冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养

6、液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃冰箱冻结法保存菌种复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

操作方法

平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

1、手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约5公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约10公分，等待约10秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖培养基为止（I区）。

2、灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II区）。

3、重复步骤2的动作完成III区与IV区。

4、灼烧接种环，将接种环归位。