简介
慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。
相关实验
实验目的
对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率,以达到目的基因的高效瞬时表达。
实验流程
1. 根据目的基因相关信息(序列,序列号等),构建含有外源基因或siRNA的重组载体;
2. 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒;
3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒
液;
4. 浓缩、纯化病毒液;
5. 用高质量的病毒液感染细胞;
6. 通过定量PCR精确测定病毒滴度(高精确滴定方法)和Western 分析实验结果;
7. 用高质量的病毒液感染宿主细胞;检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进
行稳定转染细胞株的筛选,通常状况下,筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定
性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。